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Western Blot/IP 细胞裂解液,荧光染料在科研中具有的优势及应用

2025-11-14

Western Blot/IP 细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品的裂解液,主要成分为 25mM Tris-HCl (pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40 和 5% Glycerol 等,可有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

本裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用于常规的 PAGE、Western、免疫沉淀 (Immunol Precipitation,IP)、免疫共沉淀 (Co-IP),以及许多兼容 1% NP-40 的酶活性或者生物小分子的检测。

 

Western Blot/IP 细胞裂解液适配的荧光染料,核心优势是特异性强、信号稳定、干扰低,能精准支撑裂解后蛋白的标记与检测,适配 WB 和 IP 实验需求,具体如下:

1.特异性高,检测精准无杂扰

  • 可靶向结合目标蛋白(如荧光标记抗体)或总蛋白(如荧光定量染料),仅与目标分子特异性反应,不与裂解液中去污剂、盐类等成分结合。

  • 能区分不同抗原表位或蛋白修饰状态,避免非特异性荧光信号,让 WB 条带显影清晰、IP 沉淀检测结果准确。

2.信号性能优异,支撑多元检测

  • 荧光量子产率高、光稳定性好,即使低丰度蛋白也能产生强荧光信号,可捕捉 IP 实验中微量免疫复合物的信号。

  • 发射波长覆盖广(从可见到近红外区),适配多色荧光检测,支持同时检测多种目标蛋白,提升实验效率。

3.兼容性强,无实验干扰

  • 与 WB/IP 裂解液成分(如 NP-40、Triton X-100)兼容,不会因裂解液环境导致荧光淬灭或信号衰减。

  • 不影响蛋白电泳迁移、转膜效率及抗体抗原结合,也不会干扰后续显影或成像流程,保障实验连贯性。

4.操作便捷,适配多场景应用

  • 标记流程简单,荧光染料可直接与裂解液中的蛋白样本或抗体孵育,无需复杂预处理,快速完成标记。

  • 兼容 WB 显影仪、荧光显微镜、酶标仪等常规设备,既能用于 WB 的蛋白条带定量,也能用于 IP 后的蛋白定位与含量分析。

Western Blot/IP 细胞裂解液适配的荧光染料,核心用于裂解后蛋白的特异性标记、定量与定位分析,广泛支撑 WB 和 IP 相关的分子生物学与生物医学研究,具体应用领域如下:

1.WB 实验相关检测

  • 蛋白表达定量:用荧光标记的一抗或二抗与裂解液中的目标蛋白结合,通过 WB 显影检测荧光信号强度,精准定量细胞 / 组织中蛋白的表达水平,适配差异表达蛋白筛选。

  • 蛋白修饰检测:搭配荧光标记的修饰位点特异性抗体(如磷酸化、乙?;固澹?,检测裂解液中目标蛋白的修饰状态,分析信号通路激活机制。

  • 多蛋白同步检测:利用不同发射波长的荧光染料,同时标记多种目标蛋白的抗体,实现同一张膜上多蛋白的同步检测,提升实验效率(如同时检测靶蛋白与内参蛋白)。

2.IP/Co-IP 实验相关分析

  • 免疫复合物验证:IP 实验捕获靶蛋白后,用荧光染料标记的抗体进行孵育,通过荧光成像或定量检测,验证免疫沉淀复合物中靶蛋白的存在及纯度。

  • 蛋白互作鉴定:Co-IP 实验中,用两种不同荧光染料分别标记候选互作蛋白的抗体,通过荧光信号共定位或信号强度关联分析,判断蛋白间的相互作用关系。

  • 低丰度蛋白捕获检测:借助荧光染料的高灵敏度,检测 IP 实验中低丰度靶蛋白或互作蛋白的信号,弥补传统显色法灵敏度不足的问题。

3.疾病机制与生物标志物研究

  • 疾病相关蛋白检测:从临床样本(肿瘤组织、血液细胞等)裂解液中,用荧光染料标记的特异性探针,检测疾病标志物(如癌蛋白、炎症因子)的表达与修饰水平,为疾病诊断提供依据。

  • 药物作用靶点验证:检测药物处理后,细胞裂解液中靶蛋白的表达、修饰或互作变化,验证药物作用靶点及调控机制(如化疗药物对凋亡相关蛋白的影响)。

4.基础科研与高通量筛选

  • 基因功能验证:通过 RNAi 或过表达技术调控基因后,用荧光染料标记 WB/IP 样本,检测靶蛋白表达变化,明确基因对蛋白水平的调控作用。

  • 药物高通量筛选:适配 96/384 孔板的 WB/IP 自动化检测体系,用荧光染料快速读取大规模样本的蛋白信号,筛选能调控目标蛋白表达或互作的候选药物。

本文引用地址:https://www.med-life.cn/product/1296770.html

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