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MTSEA 生物素-XX,荧光染料在科研中具有的优势及应用

2025-11-25

MTSEA 生物素染料在温和的条件下有选择地标记巯基,选择性标记细胞表面的巯基。该类产品功能一致,结构存在细微差异,具体可参考对应结构式。

MTSEA 生物素 - XX(2-(三甲基铵基)乙基甲硫代磺酸酯 - 生物素 - XX 衍生物)作为巯基特异性反应型生物素 - 荧光双功能探针,核心优势聚焦于 “巯基靶向精准性、生物素 - 荧光协同功能、生物相容性适配性”,相比单一功能荧光染料或生物素探针,在生物化学、细胞生物学、蛋白质组学等科研领域展现出不可替代的价值,具体优势如下:

一、靶向特异性极致,精准标记无交叉干扰

  1. 1.巯基专属共价结合

核心活性基团为甲硫代磺酸酯,仅与分子中游离巯基(-SH)发生亲核取代反应,形成稳定不可逆的硫醚键,对氨基、羧基、羟基等其他常见官能团无交叉反应。可在复杂生物体系(细胞裂解液、活细胞、组织样本)中精准标记含半胱氨酸的蛋白、多肽、核酸,荧光背景与非特异性结合率比常规双功能探针降低 60% 以上,实验信噪比显著提升。

2.位点选择性可控

通过调控反应条件(pH 6.5~8.0、染料 / 底物摩尔比 1:1~5:1、反应温度 25~37℃),可实现对蛋白表面暴露巯基、活性中心巯基或隐藏巯基的选择性标记,尤其适合研究蛋白构象变化(如构象重排导致隐藏巯基暴露)、蛋白 - 配体相互作用(结合后巯基微环境改变),标记精准度远超非特异性生物素 - 荧光探针。

3.抗干扰能力强

在生理缓冲液、血清、细胞内环境中,不受金属离子、酶类、还原糖等杂质影响,即使在高浓度生物大分子体系中,仍能保持对巯基的特异性结合,实验结果重复性高(RSD<5%),无需复杂样本前处理。

二、生物素 - 荧光双功能协同,一站式满足多元需求

1.双重功能集成,简化实验流程

同时具备 “巯基特异性标记 + 荧光可视化 + 生物素亲和富集” 三大功能,无需分别使用荧光染料与生物素探针进行两次标记:

荧光基团(如 FITC、Cy3、Cy5)可直接用于靶标分子的可视化成像(如细胞内定位、电泳条带荧光检测);

生物素基团可通过链霉亲和素(Streptavidin)介导的亲和作用,实现靶标分子的高效富集(如蛋白质组学中的免疫沉淀、Pull-down 实验)、分离纯化或信号放大,解决单一荧光探针 “仅能观察、无法富集” 或单一生物素探针 “仅能富集、无法实时可视化” 的缺陷。

2.连接臂设计优化,功能互不干扰

生物素与荧光基团之间通过 “XX” 长连接臂(通常为 10~20 个原子的柔性链)连接,避免两个功能基团之间的空间位阻,确保:

甲硫代磺酸酯基团对巯基的反应活性不受影响;

生物素与链霉亲和素的结合亲和力(解离常数 Kd≈10?1? M)保持最优;

荧光基团的发光性能(量子产率、光稳定性)无明显猝灭,检测灵敏度与单一荧光染料相当。

三、荧光性能优异,适配多样化检测场景

1.光谱特性灵活可调

可修饰不同荧光母核(如绿色 FITC、红色 Cy3/Cy5、近红外 Cy7),发射波长覆盖 490~800 nm,适配荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜等多种检测设备,兼容单标、多色标记实验(如与其他波段染料搭配实现细胞内多重靶标同步可视化)。

2.荧光灵敏度与稳定性兼具

荧光量子产率高(0.6~0.8),检测下限可达 pM 级别,即使是 nM 级微量含巯基靶标(如低丰度蛋白、单个细胞内的少量分子)也能实现高灵敏检测;光漂白抗性比常规荧光染料提升 30% 以上,连续激光照射 30 分钟后荧光强度仍保持 80% 以上,适合活细胞长期动态追踪。

3.信号放大潜力大

生物素与链霉亲和素的结合具有高度特异性与多价性(1 个链霉亲和素可结合 4 个生物素),可通过 “链霉亲和素 - 荧光素” 复合物进行二次标记,实现荧光信号放大,尤其适合低丰度靶标分子的高灵敏检测(如生物标志物早期诊断、微量蛋白互作分析)。

四、反应特性温和,保护生物活性

1.反应条件兼容生物体系

在生理 pH(6.5~8.0)、常温(25~37℃)下即可快速反应(反应速率常数 k≈10?~10? M?1s?1),无需高温、强酸强碱或催化剂,能最大程度保护目标分子(如酶、抗体、活细胞)的生物活性,适配活细胞标记、酶活性检测、体内微量巯基检测等场景。

2.标记稳定性强

形成的硫醚键化学稳定性极强,在体内外环境中不易水解、还原或断裂,标记后荧光信号与生物素结合活性可稳定保持数天(缓冲液中 4℃储存 1 周,荧光强度与亲和结合率均保留>90%),避免可逆性巯基探针因二硫键还原导致的功能失效,适合长期追踪或样本长期储存。

3.水溶性与细胞穿透性平衡

分子结构中含季铵盐阳离子基团与极性功能区,水溶性优异(溶解度可达 10~20 mM),可直接溶于水或缓冲液,无需添加 DMSO、乙醇等有机溶剂,减少对细胞的毒性;同时具备一定脂溶性,能穿透细胞膜进入细胞内,适配活细胞内靶标分子的标记与成像,常规标记浓度(0.1~1 μM)下细胞存活率>95%。

五、核心应用价值聚焦

  1. 蛋白质组学研究:一站式实现含巯基蛋白的特异性标记、荧光检测与亲和富集,结合质谱分析快速鉴定细胞内差异表达的含巯基蛋白(如氧化应激相关蛋白、肿瘤标志物);
  2. 蛋白互作与功能分析:标记靶蛋白的巯基后,通过荧光共振能量转移(FRET)观察蛋白构象变化,同时通过生物素 - 链霉亲和素介导的 Pull-down 实验捕获互作蛋白,同步解析蛋白功能与互作网络;
  3. 活细胞多维度研究:在活细胞内特异性标记含巯基靶标(如膜蛋白、信号通路分子),通过荧光成像追踪其动态定位,后续可通过细胞裂解与亲和富集,进一步分析靶标分子的表达水平与修饰状态;
  4. 生物标志物检测:利用 “特异性标记 + 信号放大” 优势,实现生物样本(血液、尿液)中微量含巯基生物标志物的高灵敏检测,适配疾病早期诊断与动态监测。

MTSEA 生物素 - XX具体应用领域如下:

一、蛋白质组学研究(核心应用场景)

1. 含巯基蛋白的特异性富集与鉴定

  • 针对细胞裂解液、组织提取物等复杂样本,通过 MTSEA 生物素 - XX 特异性标记含半胱氨酸的蛋白(游离巯基 - SH),再利用链霉亲和素磁珠 / 树脂进行亲和富集,去除高丰度非巯基蛋白,结合质谱分析(LC-MS/MS)实现低丰度含巯基蛋白的高效鉴定;
  • 适配氧化应激、疾病状态(如肿瘤、肝病)下的差异巯基蛋白筛选:通过对比正常与病变样本中标记蛋白的种类与丰度,发现与疾病相关的巯基蛋白标志物(如氧化修饰的代谢酶、信号通路蛋白)。

2. 蛋白巯基修饰的定量分析

  • 定量检测蛋白的翻译后修饰(如 S - 亚硝基化、谷胱甘肽化、二硫键形成):这些修饰会掩盖巯基位点,导致 MTSEA 生物素 - XX 标记效率降低,通过 “标记 - 富集 - 质谱定量” 流程,精准量化修饰水平(如药物处理后细胞内蛋白 S - 亚硝基化程度变化);
  • 适配蛋白质组学的动态追踪:标记不同时间点 / 处理条件下的细胞巯基蛋白,分析巯基氧化还原状态的动态变化,揭示细胞应激响应、信号传导的分子机制。

3. 蛋白互作网络解析

  • 采用 “标记 - Pull-down - 质谱” 策略:用 MTSEA 生物素 - XX 标记靶蛋白(如含巯基的酶、受体)的游离巯基,再通过生物素 - 链霉亲和素相互作用捕获靶蛋白及其结合的互作蛋白复合物,后续经质谱鉴定明确互作蛋白,构建巯基蛋白相关的互作网络;
  • 优势:无需抗体辅助,避免抗体非特异性干扰,尤其适合低丰度靶蛋白的互作筛选。

二、细胞生物学与活细胞成像领域

1. 活细胞内巯基靶标的可视化与定位

  • 特异性标记活细胞内含巯基的蛋白(如膜蛋白、细胞骨架蛋白、信号通路分子),通过荧光基团(如 FITC、Cy3)实现靶标分子的亚细胞定位成像(荧光显微镜、激光共聚焦显微镜);
  • 例:标记细胞膜上含巯基的离子通道蛋白,观察其在细胞表面的分布与动态迁移;标记细胞质中的谷胱甘肽(GSH),通过荧光强度变化反映细胞氧化还原状态。

2. 蛋白构象变化与动态追踪

  • 标记靶蛋白(如酶、受体)表面暴露的巯基,当蛋白发生构象重排(如配体结合、pH 变化)时,巯基微环境改变导致荧光强度 / 光谱偏移,通过荧光共振能量转移(FRET)、荧光偏振(FP)技术实时监测构象动态;
  • 适配活细胞长期追踪:标记含巯基的细胞骨架蛋白(如肌动蛋白、微管蛋白),观察细胞分裂、迁移过程中骨架的动态重组,或追踪蛋白从合成到降解的完整生命周期。

3. 细胞凋亡与氧化应激研究

  • 细胞凋亡过程中,胞内巯基暴露增加或氧化应激导致巯基减少,通过 MTSEA 生物素 - XX 的荧光信号变化,实时监测凋亡进程,结合流式细胞仪定量分析凋亡率(如抗肿瘤药物筛选);
  • 检测细胞在过氧化氢、重金属、紫外线等刺激下的巯基氧化程度,评估细胞抗氧化能力,筛选抗氧化剂或抗炎药物。

三、生物传感与检测技术领域

1. 含巯基生物标志物的高灵敏检测

  • 构建 “MTSEA 生物素 - XX + 链霉亲和素信号放大” 检测平台:特异性标记生物样本(血液、尿液、唾液)中含巯基的生物标志物(如半胱氨酸 Cys、同型半胱氨酸 Hcy、肿瘤相关含巯基蛋白),通过生物素 - 链霉亲和素介导的荧光信号放大(如链霉亲和素 - 荧光素复合物二次结合),检测下限可达 pM 级别;
  • 适配疾病早期诊断:如通过检测血清中 Cys/Hcy 水平预警心血管疾病,检测肿瘤患者尿液中特异性含巯基蛋白标志物辅助诊断。

2. 环境与食品污染物检测

  • 制备 MTSEA 生物素 - XX 功能化传感器(如量子点、纳米微球、试纸条),特异性结合环境水体、食品中的巯基反应型污染物(如重金属离子 Hg2?、Ag?,有机污染物环氧乙烷、卤代烃):
    • 重金属离子与巯基结合后,抑制探针与生物素的亲和作用,导致荧光信号猝灭;
    • 有机污染物与巯基发生加成反应,改变荧光光谱,实现快速定量检测。

3. 酶活性检测与抑制剂筛选

  • 标记酶活性中心的半胱氨酸巯基(如半胱氨酸蛋白酶、激酶、脱氢酶),酶与底物结合或抑制剂干预后,巯基微环境改变导致荧光强度变化,同时可通过生物素富集酶 - 底物复合物,量化酶活性;
  • 适配高通量筛选:在 96 孔板中用 MTSEA 生物素 - XX 标记靶酶,加入候选抑制剂,通过荧光信号变化快速筛选具有抑制活性的小分子化合物。

四、其他前沿科研场景

1. 膜蛋白与信号通路研究

  • 特异性标记细胞膜蛋白(如 G 蛋白偶联受体、离子通道、转运蛋白)的胞外 / 胞内巯基,通过荧光成像观察膜蛋白的二聚化、内吞过程,或通过富集分析膜蛋白的翻译后修饰与互作蛋白,解析信号传导机制;
  • 标记信号通路分子(如 Ras、MAPK 家族蛋白)的关键巯基,追踪信号激活后蛋白的亚细胞定位变化,明确信号通路的调控网络。

2. 纳米生物材料与药物递送

  • 修饰纳米载体(如脂质体、金纳米粒子、碳纳米管)表面的巯基,通过 MTSEA 生物素 - XX 荧光标记追踪纳米载体在细胞内的摄取、分布与代谢,优化纳米药物递送系统;
  • 利用生物素 - 链霉亲和素的特异性结合,实现纳米载体与靶细胞的靶向结合(如链霉亲和素修饰的靶细胞表面抗原抗体),提升纳米药物的靶向递送效率。

3. 教学与基础实验

  • 作为高校生物化学、分子生物学的实验教学工具,用于蛋白特异性标记、荧光成像、亲和富集等基础实验,帮助学生理解巯基特异性反应、生物素 - 链霉亲和素相互作用原理;
  • 适配 “标记 - 可视化 - 富集” 一体化实验教学,展示复杂样本中目标分子的分离与鉴定流程。

本文引用地址:https://www.med-life.cn/product/1296815.html

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